二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染
混入二氧化碳培養(yǎng)箱(細胞培養(yǎng)環(huán)境)中,對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)視為污染。不同的污染物對細胞的影響也有差別,有的影響是長期、緩慢和潛在的,而有的則能在很短的時間內(nèi)抑制細胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)細胞。根據(jù)污染源不同主要可以分為:生物性污染、化學(xué)性污染、物理性污染和氣溶膠污染。
1、生物性污染:
這是最常見也是危害最大的污染。如細菌、病毒、真菌,支原體等。這些污染源有可能是人為帶入,或是細胞在放入二氧化碳培養(yǎng)箱前已經(jīng)受污染,再或者是箱體本身沒有消毒干凈。體外培養(yǎng)的細胞自身沒有抵抗污染的能力,而培養(yǎng)基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的,因而細胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。
2、化學(xué)性污染:
二氧化碳培養(yǎng)箱中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細胞污染。如細胞培養(yǎng)容器清洗過程中殘留的洗滌劑、加濕器中未純化的水、人為帶入的液體或氣體都可能成為化學(xué)性污染的來源。不同化學(xué)物質(zhì)對細胞污染是不一樣的,有的可能促進或抑制細胞生長,有的甚至殺死細胞。
3、物理性污染:
培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素,如溫度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細胞產(chǎn)生影響。物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染,其主要是在代謝水平或分子水平上,影響細胞正常的生理過程。
4、氣溶膠污染:
氣溶膠是液體或固體微粒均勻地懸浮在氣體介質(zhì)中的分散體系,當微粒是微生物時,就是微生物氣溶膠,如果這種微生物是病原性的,就是病原微生物氣溶膠。細菌、病毒等病原體通過氣溶膠可在人與人、人與環(huán)境之間傳播。
二氧化碳培養(yǎng)箱污染防控措施
1、二氧化碳培養(yǎng)箱的選擇:
二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設(shè)計了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生,其主要是防污染設(shè)計和消毒滅菌系統(tǒng)的改進,以達到消毒滅菌的目的。如帶有紫外消毒功能的二氧化碳培養(yǎng)箱、帶HEPA過濾器的二氧化碳培養(yǎng)箱,以及帶高溫消毒的二氧化碳培養(yǎng)箱等,后者又分為高溫干熱和高溫濕熱兩類。這些裝置的滅菌能力各有千秋,紫外燈消毒范圍有限,距離燈越遠,消毒能力越差。
HEPA過濾器的過濾膜孔徑有限,無法去除病毒和一些微小細菌,并且容易損耗,也有其局限性。相比而言,高溫消毒則是比較有效的方法。而高溫干熱和高溫濕熱也有所不同,由于蒸汽潛熱大、穿透力強,容易使蛋白質(zhì)變性或凝固,因此高溫濕熱的滅菌效率比干熱滅菌法高。
2、提高素質(zhì):
人為因素和態(tài)度可以對環(huán)境、人和物起到一個正面或負面的影響。以安全為目的,實驗室內(nèi)的工作人員應(yīng)明白自身的態(tài)度和人為因素對實驗環(huán)境的重要性。因此,對實驗室工作人員進行培訓(xùn)。
3、重視管理:
細胞室內(nèi)的二氧化碳培養(yǎng)箱應(yīng)由專人負責(zé)管理,定期對系統(tǒng)進行校正,至少每年一次。各項數(shù)值一旦固定后,不要隨意調(diào)節(jié),以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動,降低機器的靈敏度,同時還會影響二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的細胞生產(chǎn)狀態(tài)。
使用前,對二氧化碳培養(yǎng)箱的各項指標進行系統(tǒng)校正,并且對箱體和內(nèi)部進行消毒處理,等各項數(shù)值穩(wěn)定一段時間后方可使用。一旦出現(xiàn)緊急問題,應(yīng)及時上報,應(yīng)由專業(yè)的人員進行操作,馬上采取應(yīng)對措施,以免造成不必要的損失。
4、規(guī)范操作:
二氧化碳培養(yǎng)箱的使用雖然很簡單,但同樣需要規(guī)范操作。進細胞室必須穿著實驗服(白大褂),換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實驗操作時必須帶一次性手套,特別是打開二氧化碳培養(yǎng)箱前,必須先用75%的酒精噴壺噴洗雙手再開二氧化碳培養(yǎng)箱,再取出細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后,再放回二氧化碳培養(yǎng)箱時,同樣也要噴酒精消毒。
二氧化碳培養(yǎng)箱的兩個門開關(guān)取(放)物要迅速,不可長時間開著,否則會影響CO2的濃度、溫度和濕度,以及造成污染。尤其是不要忘了關(guān)好里層的玻璃門。切記開門時不要對著二氧化碳培養(yǎng)箱說活,大口呼吸甚至是打噴嚏。
5、加強防護:
如果實驗人員生病而攜帶病菌,應(yīng)帶上口罩再進細胞室,病情嚴重的則不宜進行實驗。女性同志實驗時頭發(fā)應(yīng)梳起,防止皮屑污染及連帶事件的發(fā)生。如果實驗室條件允許,可以每人佩戴實驗帽、手套和口罩,以防污染二氧化碳培養(yǎng)箱及對實驗人員的自身的防護。
6、注重保養(yǎng):
二氧化碳培養(yǎng)箱置于細胞室中,室內(nèi)需保持干燥,環(huán)境溫度不能超過30℃(建議:18℃-30℃)。二氧化碳培養(yǎng)箱放置在遠離門窗、供暖設(shè)備和空調(diào)導(dǎo)管的地方,不能被陽光直接照射。二氧化碳培養(yǎng)箱的放置臺面必須水平避震且非易燃材質(zhì),不能靠在墻壁或類似的建筑物上,其后部接電處和墻壁至少保留30cm的空間。一旦放好不宜再移動。
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